NAD+/NADH Colorimetric Assay Kit (WST-8)

Принцип обнаружения: Определяют суммарное содержание NAD⁺ и NADH. Этанол под действием фермента превращается в ацетальдегид. При этом NAD⁺ восстанавливается до NADH, который с участием переносчика водорода передаёт электроны на WST-8 с образованием жёлтого продукта, имеющего характерный пик поглощения при 450 нм. Таким образом, суммарное содержание NAD⁺ и NADH количественно определяют по оптической плотности при 450 нм.

Определение NADH: после обработки образца его нагревают при 60 °C в водяной бане 30 минут, при этом NAD⁺ разрушается, остаётся только NADH. NADH восстанавливает WST-8 с образованием жёлтого продукта, и его количество определяется по OD при 450 нм.

Определение NAD⁺ и соотношения NAD⁺/NADH: содержание NAD⁺ и соотношение NAD⁺/NADH рассчитывают на основании суммарного содержания NAD⁺ и NADH (из первых двух этапов), а также отдельного содержания NADPH.
Примечание: NADP⁺ и NADPH не влияют на результаты определения.

Синонимы: NAD⁺/NADH
Тип образца: ткани животных, клетки
Метод детекции: колориметрический метод
Прибор: микропланшетный ридер (450 нм)
Область исследований: окислительный стресс, метаболические заболевания, гликолиз и метаболизм липидов, энергетический обмен
Другие необходимые реагенты: PBS (0,01 моль/л, pH 7,4)
Хранение: при −20°C, 12 месяцев, в защищённом от света виде
Срок годности: 12 месяцев
Чувствительность: 0,02 мкмоль/л
Диапазон измерения: 0,02–5,0 мкмоль/л
Точность: межсерийный CV 9,1% | внутрисерийный CV 1,8%
Объём образца: 20 мкл (гомогенат тканей/клеток)
Время анализа: 1 ч 10 мин