Cell Cycle Assay Kit (Blue Fluorescence)

Принцип детекции
Клеточный цикл представляет собой полный процесс от окончания одного митоза до окончания следующего. В ходе этого процесса генетический материал реплицируется, удваивается и равномерно распределяется между двумя дочерними клетками в конце деления.

Клеточный цикл подразделяется на фазы: интерфазу и митотическую фазу. Интерфаза включает стадии: покоя (G0), пресинтетическую фазу (G1), синтетическую фазу (S) и постсинтетическую фазу (G2). Анализ содержания ДНК позволяет оценить состояние каждой фазы клеточного цикла, что также используется для оценки клеточной пролиферации.

ДНК связывается с флуоресцентными красителями (например, Cycle Blue). Количество связанного красителя зависит от стадии клеточного цикла, а интенсивность флуоресценции, регистрируемая методом проточной цитометрии, позволяет различать клетки в разных фазах цикла.

При апоптозе происходит конденсация цитоплазмы и хроматина с образованием апоптотических телец, а также фрагментация ДНК, что изменяет светорассеивающие свойства клеток. На ранней стадии апоптоза наблюдается значительное снижение прямого светорассеяния (FSC), тогда как боковое рассеяние (SSC) увеличивается или остаётся без изменений. На поздней стадии апоптоза снижаются как FSC, так и SSC. Таким образом, апоптотические клетки могут быть выявлены по изменениям светорассеяния методом проточной цитометрии.

После окрашивания Cycle Blue, если принять интенсивность флуоресценции клеток в фазе G0/G1 за 1, то для клеток в фазе G2/M (с удвоенным содержанием ДНК) она будет равна 2, а для клеток в S-фазе — находиться в диапазоне от 1 до 2. Апоптотические клетки вследствие фрагментации ДНК характеризуются сниженной интенсивностью окрашивания, поэтому их флуоресценция составляет <1. На гистограмме проточной цитометрии это проявляется в виде пика sub-G1, соответствующего апоптотическим клеткам.

Набор может быть использован для определения содержания ДНК (анализа клеточного цикла) в культивируемых клетках (суспензионных и адгезивных).

Метод определения
Флуорометрический метод, проточная цитометрия

Тип образца
Клеточные образцы

Время анализа
3 часа

Оборудование
Проточный цитометр

Тип красителя
Cycle Blue

Длина волн (Ex/Em)
364/454 нм

Канал детекции
DAPI

Дополнительные реагенты
Этанол, фосфатно-солевой буфер (PBS, E-BC-R187)

Условия хранения
Хранить при −20 °C в течение 12 месяцев, защищая от света

Срок годности
12 месяцев

Транспортировка
С охлаждающим элементом (ледяной пакет)