E-Click EdU Cell Proliferation Imaging Assay Kit (Red, Elab Fluor® 647)

Принцип детекции
Анализы клеточной пролиферации широко применяются для оценки жизнеспособности клеток, генотоксичности и эффективности противоопухолевых препаратов. Прямое определение синтеза ДНК в клетках считается наиболее точным методом оценки клеточной пролиферации.

Первоначально для выявления синтеза ДНК использовали метод включения радиомеченых нуклеозидов, однако он был существенно ограничен из-за риска радиоактивного загрязнения и трудностей анализа на уровне отдельных клеток и постепенно был заменён методом BrdU, основанным на иммунологическом выявлении. Метод BrdU включает множество этапов, требует использования специфических антител, характеризуется большим количеством факторов, влияющих на результат, и относительно низкой стабильностью.

Метод EdU основан на включении EdU и последующей «click»-реакции, не требует использования антител, отличается простотой выполнения и высокой чувствительностью. Он представляет собой усовершенствованную технологию, разработанную на основе метода BrdU и постепенно его заменяющую.

EdU (5-этинил-2-дезоксиуридин) является аналогом тимидина. EdU замещает тимидин в процессе синтеза ДНК и включается в вновь синтезированную ДНК.

Ацетиленовая группа EdU вступает в реакцию с флуоресцентно мечеными азидными зондами (например, FITC Azide, Elab Fluor® 488 Azide, Elab Fluor® 594 Azide, Elab Fluor® 647 Azide) в присутствии одновалентных ионов меди, образуя стабильное триазольное кольцо. Эта реакция протекает быстро и называется «click»-реакцией.

В результате click-реакции вновь синтезированная ДНК метится соответствующим флуоресцентным зондом, что позволяет выявлять пролиферирующие клетки с использованием подходящего оборудования для флуоресцентной детекции.

Метод определения
Флуорометрический метод

Тип образца
Клеточные слайды; клеточные мазки

Время анализа
2 часа

Оборудование
Лазерный конфокальный микроскоп (или флуоресцентный микроскоп с Cy5-фильтром)

Тип красителя
Elab Fluor®647

Длина волн (Ex/Em)
650/665 нм

Фильтр
Cy5

Дополнительные реагенты
PBS (pH 7,2–7,6) (E-BC-R187), PBS с 3% BSA (pH 7,2–7,4), PBS с 0,3% Triton X-100 (pH 7,2–7,6), 4% параформальдегид (в PBS) (E-IR-R113), деионизированная вода

Условия хранения
Хранить при −20 °C в течение 12 месяцев, защищая от света

Срок годности
12 месяцев

Транспортировка
С охлаждающим элементом (ледяной пакет)