E-Click EdU Cell Proliferation Imaging Assay Kit (Green，Elab Fluor® 488)

Принцип детекции
Анализы пролиферации клеток широко применяются для оценки жизнеспособности клеток, генотоксичности и действия противоопухолевых препаратов. Прямое определение синтеза ДНК в клетках считается наиболее точным методом оценки клеточной пролиферации.

Первоначально для выявления синтеза ДНК использовали метод включения радиомеченых нуклеозидов, однако он был существенно ограничен из-за радиоактивного загрязнения и трудностей анализа на уровне отдельных клеток и постепенно был заменён методом BrdU, основанным на использовании антител. Метод BrdU включает множество этапов, требует применения специфических антител, характеризуется большим количеством факторов, влияющих на результат, и низкой стабильностью.

Метод EdU основан на включении EdU и последующей «click»-реакции, не требует использования антител, отличается простотой выполнения и высокой чувствительностью. Он представляет собой усовершенствованную технологию, разработанную на основе метода BrdU и постепенно его заменяющую.

EdU (5-этинил-2-дезоксиуридин) является аналогом тимидина. EdU может замещать тимидин в процессе синтеза ДНК и встраиваться в вновь синтезированную ДНК.

Ацетиленовая группа EdU вступает в реакцию с флуоресцентно мечеными азидными зондами (например, FITC Azide, Elab Fluor® 488 Azide, Elab Fluor® 594 Azide, Elab Fluor® 647 Azide) в присутствии одновалентных ионов меди, образуя стабильное триазольное кольцо. Эта реакция протекает быстро и называется «click»-реакцией.

Благодаря данной реакции вновь синтезированная ДНК маркируется флуоресцентным зондом, что позволяет выявлять пролиферирующие клетки с использованием соответствующего оборудования для флуоресцентной детекции.

Метод определения
Флуорометрический метод

Тип образца
Клеточные слайды; клеточные мазки

Время анализа
2 часа

Оборудование
Флуоресцентный микроскоп

Тип красителя
Elab Fluor®488

Длина волн (Ex/Em)
495/519 нм

Фильтр
FITC

Дополнительные реагенты
PBS (pH 7,2–7,6) (E-BC-R187), PBS с 3% BSA (pH 7,2–7,4), PBS с 0,3% Triton X-100 (pH 7,2–7,6), 4% параформальдегид (в PBS) (E-IR-R113), деионизированная вода

Условия хранения
Хранить при −20 °C в течение 12 месяцев, защищая от света

Срок годности
12 месяцев

Транспортировка
С охлаждающим элементом (ледяной пакет)