Cell Cycle Assay Kit (Red Fluorescence)

Принцип детекции
Клеточный цикл — это полный процесс от окончания одного митоза до окончания следующего. В ходе этого процесса генетический материал реплицируется и удваивается, а затем равномерно распределяется между двумя дочерними клетками по завершении деления. Клеточный цикл подразделяется на фазы: интерфазу и митотическую фазу.

Интерфаза, в свою очередь, включает стадии: покоя (G0), пресинтетическую фазу (G1), синтетическую фазу (S) и постсинтетическую фазу (G2). Определение содержания ДНК позволяет оценить состояние каждой фазы клеточного цикла, что также отражает уровень клеточной пролиферации.

ДНК способна связываться с флуоресцентными красителями (например, пропидий йодид, PI). Количество связанного красителя зависит от стадии клеточного цикла, а интенсивность флуоресценции, регистрируемая методом проточной цитометрии, позволяет различать клетки в разных фазах цикла.

При апоптозе происходит конденсация цитоплазмы и хроматина, а также фрагментация ДНК с образованием апоптотических телец, что изменяет светорассеивающие свойства клеток. На ранней стадии апоптоза наблюдается значительное снижение прямого светорассеяния (FSC) и увеличение или отсутствие изменений бокового рассеяния (SSC). На поздней стадии апоптоза снижаются как FSC, так и SSC. Таким образом, апоптотические клетки можно выявить по изменениям светорассеяния при проточной цитометрии.

После окрашивания PI, если принять интенсивность флуоресценции клеток в фазе G0/G1 за 1, то для клеток в фазе G2/M (с удвоенным содержанием ДНК) она будет равна 2, а для клеток в S-фазе — находиться в диапазоне от 1 до 2. Апоптотические клетки вследствие фрагментации ДНК теряют часть генетического материала, поэтому после окрашивания PI характеризуются сниженной интенсивностью флуоресценции (<1). На гистограмме проточной цитометрии это проявляется в виде пика sub-G1, соответствующего апоптотическим клеткам.

Набор предназначен для определения содержания ДНК (анализа клеточного цикла) в культивируемых клетках (как суспензионных, так и адгезивных).

Метод определения
Флуорометрический метод, проточная цитометрия

Тип образца
Клеточные образцы

Время анализа
3 часа

Оборудование
Проточный цитометр

Тип красителя
PI (пропидий йодид)

Длины волн (Ex/Em)
536/617 нм

Настройки каналов
PI, PerCP, PE

Дополнительные реагенты
Этанол, фосфатно-солевой буфер (PBS, E-BC-R187)

Условия хранения
Хранить при 2–8 °C или −20 °C в течение 12 месяцев, защищая от света. Конкретные условия хранения компонентов указаны в инструкции.

Срок годности
12 месяцев

Транспортировка
С охлаждающим элементом (ледяной пакет)